基質(zhì)效應(yīng)是影響ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性的重要因素,它指的是樣本中除目標(biāo)分析物以外的其他成分對檢測過程產(chǎn)生的干擾。這種效應(yīng)會導(dǎo)致測得的分析物濃度與實(shí)際濃度出現(xiàn)偏差。
一、基質(zhì)效應(yīng)的具體影響
基質(zhì)效應(yīng)主要通過干擾抗體與目標(biāo)蛋白的結(jié)合能力來影響ELISA結(jié)果。具體表現(xiàn)包括:
?導(dǎo)致OD值異常?:zui明顯的現(xiàn)象是測得的OD值遠(yuǎn)低于預(yù)期。
?影響定量準(zhǔn)確性?:基質(zhì)效應(yīng)會造成測量濃度與實(shí)際濃度的偏差,影響實(shí)驗(yàn)的定量分析。
?產(chǎn)生假陰性結(jié)果?:當(dāng)樣本值接近或低于空白值時,可能是基質(zhì)效應(yīng)導(dǎo)致的假陰性現(xiàn)象。
二、如何判斷基質(zhì)效應(yīng)
zui常用的判斷方法是進(jìn)行?加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)。該實(shí)驗(yàn)通過比較添加已知濃度標(biāo)準(zhǔn)品后測得的濃度與理論濃度的比例(回收率)來評估基質(zhì)效應(yīng):
回收率在80%-120%之間:認(rèn)為無顯著基質(zhì)效應(yīng)
回收率低于80%:表明存在基質(zhì)效應(yīng)
三、如何克服基質(zhì)效應(yīng)
克服基質(zhì)效應(yīng)的常用方法包括:
?稀釋樣本?:用與稀釋標(biāo)準(zhǔn)品相同的緩沖液將樣本至少稀釋2倍
?使用基質(zhì)緩沖液?:一些ELISA試劑盒會提供特殊配方的"基質(zhì)稀釋液"來抵消基質(zhì)效應(yīng)
?建立校正曲線?:通過已知分析物濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品,在保持樣本基質(zhì)不變的情況下建立校正曲線?。
基質(zhì)效應(yīng)是ELISA實(shí)驗(yàn)中需要特別關(guān)注的問題,通過合理的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和質(zhì)量控制措施,可以有效減少其對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。