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常見的幾種細胞污染及解決方法
  • 發布日期:2022-08-15      瀏覽次數:1865
    •  細胞污染一般可分為微生物污染和真核生物污染。其中微生物污染包括真菌和酵母、細菌、支原體等。而真核生物一般是細胞系間的交叉污染。 細胞常見的污染情況總結如下:

      1、細菌污染:

      細菌是一種原核細胞微生物,其大小以微米(μm)計。常見的污染細菌有革蘭氏陰性菌和大腸桿菌、假單胞菌等,革蘭氏陰性菌中白色葡萄球菌等比較常見。

      一旦發生細菌污染較易發現,多數情況下培養液短期內顏色變黃,表明有大量酸性物質產生,出現明顯混濁現象;有時靜置的培養液液體初看不混濁,但稍加振蕩,就有很多混濁物漂起。倒置顯微鏡下觀察,可見培養液中有大量圓球狀顆粒漂浮。必要時可取少量培養液涂片染色檢查以證實細菌種類;有的培養液改變不明顯而又疑有污染,可取出少量培養液用普通肉湯接種或用未加雙抗藥物的培養液接種,也可取10ml細胞懸液以100rpm離心5min,沉淀中加入無抗生素的培養液2ml,置于37℃培養,24h可得結果。污染后細胞發生病理改變,胞內顆粒增多、增粗,最后變圓脫落死亡,造成試驗失敗和細胞株(系)丟失。

      看到這種,別猶豫了你的細胞被污染了,那么怎么辦呢,基本原則立馬扔掉,別擴大污染,如果你的細胞真的十分寶貴,先用帶有雙抗的PBS反復沖洗幾遍,然后再培養液中加入硫酸慶大霉su、新霉su(50ug/ml)等,培養3天后換成帶有雙抗的培養液培養。

      2、真菌污染:

      是細胞培養過程中最常見的一種,尤其在梅雨季節進行細胞培養更易污染。污染培養細胞的多為煙曲霉、黑曲霉、毛霉菌、孢子霉、白念珠菌、酵母菌等。霉菌污染后多數在培養液中形成白色或淺黃色漂浮物。一般肉眼可見,較易被發現,短期內培養液多不混濁,倒置顯微鏡下可見于細胞之間縱橫交錯穿行的絲狀、管狀、及樹枝狀菌絲,并懸浮飄蕩在培養液中。很多菌絲在高倍鏡可見到有鏈狀排列的菌珠;念珠菌或酵母菌形態呈卵形,散在細胞周邊和細胞之間生長。鏡下看時,要將培養瓶用酒精棉球擦干凈,以防止與瓶外尤其瓶底外面生長的菌絲相混淆。真菌污染后,細胞生長變慢,但最后由于營養耗盡及毒性作用而使細胞脫落死亡。

      真菌污染真的不建議處理,因為孢子容易飄散,可能這瓶沒9過來,又擴大了污染,建議預防為主,在培養箱的水中加入硫酸銅,就是藍色的那種東西。哎,如果你非救不可,可以采用兩性霉su B(0.25-2.5),三天后換液加入含PS的培養液。

      3、支原體污染:

      支原體是一種大小介于細菌和病毒之間(最小直徑0.2um)并獨立生活的微生物。約有1%可通過濾菌器。支原體無細胞壁形態呈高度多形性。可為圓形、絲狀或梨形。

      支原體形態多變,在光境下不易看清內部結構。電鏡下觀察支原體膜為三層結構。其中央有電干密度大的密集顆粒群或絲狀的中心束。支原體多吸附或散在于細胞表面和細胞之間。橫斷面與細胞微絨毛相似,但微絨毛電子密度比支原體小,且中央無顆粒群或中央束。

      支原體污染細胞后,培養液可不發生混濁。多數情況下細胞病理變化輕微或不顯著,細微變化也可由于傳代、換液而緩解,因此易被忽視。但個別嚴重者,可致細胞增殖緩慢,甚至從培養器皿脫落。

      如果懷疑細胞被支原體污染可使用支原體檢測試劑盒進行檢測,如果確定是支原體污染可以選擇支原體去除試劑進行處理。

      4、霉菌污染

        同真菌感染一致,因為培養液是清亮的,所以霉菌污染早期難以發現,等發現時往往已經為時過晚了。培養液中慢慢地出現絮狀雜質,鏡下可見呈細絲狀的團狀漂浮物,如同風中柳絮,一般不仔細看發覺不出來。細胞仍可生長,但時間一長,細胞的狀態就變差,不再增長。

        處理方法:建議果斷舍棄該污染細胞,將環境*消毒,因為霉菌的頑固可能會導致下幾批細胞都會污染,所以,采用酒精*底地擦洗一遍CO2孵箱。然后再用新潔爾滅擦洗一遍,把水盤里加上飽和量的硫酸銅。千萬不可大意!

      5、黑膠蟲污染

        開始污染時對細胞無影響,當數量達到一定程度時就會對細胞產生影響。400倍顯微鏡下可見點狀或片狀游動小體,培養液也是不渾的,一般不會太影響,細胞還是可以用的。常常是細胞生長狀態良好,且觀測到的運動物無明顯增多,且培養液顏色、透明度無明顯變化,對細胞生長狀態不會有明顯影響,在細胞增殖旺盛之后會自然消失,除更換血清外無須特殊處理。

        處理方法:可以增加細胞的種板密度,以提高細胞的生存率,盡早處理細胞,越快越好。如果實在來不及了,推薦使用——黑膠蟲清除培養基


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